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            皮下植瘤原位瘤模型
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            一、皮下植瘤模型 

            裸鼠腫瘤模型是比較常見和常用的一種腫瘤動物模型,它在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作 用。裸鼠腫瘤模型的接種一般有細胞接種和瘤塊接種兩種方式,接種取材有手術活檢標本、癌性胸腹水標 本和體外培養的細胞系三種。

            裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的優點。 

            常見模型 

            腫瘤類型 

            細胞系 

            肺癌 A549,NCH-H358,NCH-H460,NCH-H526, NCH-H1299,NCH-H1650,NCHH1688,NCH-H1975,95-D,PC-10,Calu-3

            乳腺癌 MDA-MB-231, MDA-MB-468, MDA-MB-453, HCC70, HCC1954, MDA-MB-361, MCF-7, BT474, BT549, SK-BR-3 

            胃癌 MKN-28, MKN-45, BGC-823, HGC-27, MKN-28, SCH, SGC-7901, SNU-5, SNU16, MGC-803, AGS 肝癌 Hep-3B, Huh-7, PLC/PRF/5, QGY-7703, SK-HEP-1, SMMC-7721, HepG-2, BEL7402, BEL-7404, MHCC97H, LM3 

            胰腺癌 AsPC-1, BxPC-3, Capan-1, Capan-2, CFPAC-1, MIAPaCa-2, PANC-1 

            腎癌 ACHN, A498, 786-O, OS-RC-2 

            結直腸癌 COLO 201, COLO 205, DLD-1, HCT-116, HT-29, LoVo, LS1034, LS174T, Caco2, RKO , SW480, SW620, SW1116, SW948 

            膠質細胞瘤 A172, U87-MG, U251, U343MG, U373, SW1783

            常見案例 

            裸鼠皮下成瘤模型(CDX模型) 

            模型描述: 



            常見問題 

            1.接種量 要查文獻來確定接種量,在找不到任何相關資料的情況下,就用到1*107/0.2ml/site,再高也沒有意義 了。如果你的細胞很小,1*107/0.1ml也可以操作,不至于很粘稠,那么最好是1*107/0.1ml/site。查文獻 看他們的構建條件是什么樣的,比如培養條件,接種量,接種位置什么的,是不是一定要用雌性鼠等等。 

            2.接種部位 腋窩中部外側皮下為好。皮下腫瘤模型中,想要成瘤率高就接種在腋下。接種時由裸鼠體側腰部稍靠 上的部位進針,要保證與接種點的距離小于針頭的長度,向頭部方穿行,絕對不能刺破皮膚或者刺破肌肉 層,當針頭到達接種位點時注射,退出針頭。 

            3.是否用手術標本荷瘤 如果是藥效試驗,不建議用手術標本,因為SFDA的臨床前研究指導原則上明確指出要用建株的腫瘤 株進行試驗,因為用手術標本的試驗可重復性差。取材的部位:腫瘤生長活躍,狀態良好,結締組織比較 少的地方。運送途徑:無菌、冰浴保溫,無菌培養液浸泡,時間不能超過1個小時。最好一個小時內就能 夠接種到動物體內。接種部位:腋下。另外,手術標本還有一個風險:你不能保證取得的標本一定能夠順 利地成瘤并且用于試驗。 

            4.接種時間 最好在1小時之內完成。但在我實際操作過程中,裸鼠的數量又多,1小時之內根本做不完的,所以你 可以預先將細胞放在冰盒里暫為保存。 

            5.腫瘤倍增時間 腫瘤動物實驗模型腫瘤的倍增時間(doubling time),應該是在瘤體積100-800之間計算。

             二、原位瘤模型 

            原位移植腫瘤模型的制作 

            1.腫瘤的來源:人的胸腹水,手術切除的腫瘤,小鼠自發或誘發的腫瘤,或者已經建系的腫瘤細胞株。 2.移植瘤的建立一般是選擇自發瘤或誘發瘤組織塊,或人的原代腫瘤細胞為佳。 已建立的腫瘤細胞株經過多次傳代后,其生物學特性已發生一定程度的改變,如形態學上的改變、惡 性程度以及轉移特性的變化等 

            3.移植瘤的接種方法 

            1)腹水瘤移植接種法 

            2)實體瘤移植接種法 

            (1)小塊接種法 

            (2)腫瘤組織漿接種法: 

            (3)培養細胞接種法 

            4.腹水型腫瘤模型的制作 

            常規復蘇腫瘤細胞并培養,取指數生長期腫瘤細胞,離心收集,顯微鏡下細胞計數,調整細胞濃度為 1×107/ml,取健康小鼠,無菌條件下每只小鼠腹腔接種細胞懸液 0.2-0.5 ml,約 8-10 d 成腹水瘤。 

            5.皮下腫瘤模型的制作 

            1).細胞接種法:取腹腔接種腫瘤細胞 7-l0d 、腹水生長良好的小鼠脫頸處死,無菌抽取腹水以生理鹽 水稀釋調整細胞濃度為 1×107/ml(一般以生理鹽水 l:2-l:3 倍稀釋),每只 0.2 ml 接種到小鼠腋窩皮下, 建立小鼠皮下移植瘤模型。抽出的腹水應為白色之濃稠液體為佳。.直接將體外培養的指數生長期腫瘤細 胞,離心收集,顯微鏡下常規細胞計數,調整細胞濃度為 1×107/ml,取健康小鼠,無菌條件下每只小鼠 皮下接種細胞懸液 0.2 ml。 

            2).組織塊接種法:先用細胞接種法建立皮下腫瘤模型。 選擇接種后 7-l0d,腫瘤生長旺盛且無潰破的 動物,脫頸處死后消毒操作部位皮膚然后切開,選擇生長良好的瘤組織置于無菌平皿內(平皿內放置少許生 理鹽水或細胞培養液)。將腫瘤組織剪成 2-3mm 的小塊,向無菌套管內塞人一小塊,接種于健康動物前腋 窩皮下,整個接種時間應盡早可能短,一般不應超過 30min。如接種動物數較多,可制成細胞懸液進行接 種,以上法切取生長良好的癌組織,剪成小塊,用無菌玻璃研磨,磨勻后裝人無菌容器內,加生理鹽水稀 釋 l:3-l:4 的瘤細胞,每個動物接種 0.2ml。 

            6.移植性腫瘤模型的優點: 

            1).可以使一群動物同時帶有相同的腫瘤。 

            2).腫瘤生長速率比較一致,個體差異較小。 

            3).接種的成活率高,接近 100% ,對宿主的影響也類似,易于客觀的判斷療效。 

            4). 腫瘤形態、生長率、對藥物的敏感性、動物的死亡時間等非常相近。、 

            7.皮下移植性腫瘤的缺點:
            1).皮下移植腫瘤生長速度快,增殖比率高,體積倍增時間短,是與人體腫瘤的顯著不同。
            2).生物學行為往往僅有腫瘤的局限性生長和浸潤,難以觀察到重要的淋巴和血道轉移行為,與自然狀態腫痛相關性不高,不能很好地模擬腫痛在人體內的自然生長過程,對干研究具病理生理過程存在較大的局限性,僅適合用作評價藥物療效的初步篩選模型。

            8.原位移植腫瘤模型: 指將腫瘤細胞或腫瘤組織塊原位移植到免疫缺陷動物的組織器官內,使之產生腫瘤并形成自發性轉移 灶。此種模型是目前較為理想的動物模型,為腫瘤的生長提供了最適宜的環境,能較好的模擬人體內腫瘤 的發生、 發展、侵襲及轉移的全過程。 

            9.原位移植腫瘤模型的制作: 

            1).腫瘤的來源:人的胸腹水,手術切除的腫瘤,小鼠自發或誘發的腫瘤,或者已經建系的腫瘤細胞 株。2).方法:將稀釋好的腫瘤細胞 50-100ul 約 2×108/ml 直接接種到器官的漿膜下?;蛘呦葘⒛[瘤細胞 皮下接種,達 1 cm左右,瘤組織取出切成 1-3mm 的小塊。將準備好的癌組織塊植入器官的漿膜下,縫合 漿膜。

            10.同位移植瘤動物模型的優點: 可以模擬出同原發腫瘤發病部位相似的腫瘤微環境,同時也能夠在相應的部位形成轉移灶,可以避免 由于移植位點特異性所引起的假陽性結果.并且可以對臨床上的一些情況進行模擬,如應用在轉移癌的研 究來模擬那些臨床上已經切除了原發腫瘤而又發生了轉移的患者。同位裸鼠移植瘤動物模型成為我們研究 治療方案,闡明與浸潤、轉移和腫瘤治療相關的分子生物學機制提供了重要而有效的手段。 

            11.原位移植瘤模型的應用: 

            1)為彌補異位移植方法的不足,避免假陽性結果的產生。對于所有實驗性治療方法來講,最終都要應 用原位移植瘤動物模型來更深一步研究其抗腫瘤譜及其分子生物學機制。 

            2)對于細胞毒類藥物,那些對腫瘤微環境起調控作用的抗腫瘤藥物只可以在原位移植瘤動物模型上進 行研究。如可以調節腫瘤細胞產物的化療藥物和可以調控機體局部組織反應的藥物。 

            3)如果想觀察藥物對轉移性腫瘤的作用,最好應用原位裸鼠移植瘤動物模型進行研究。 

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