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            實時熒光定量PCR實驗服務



            【星森林生物】提供快捷高效的實時熒光定量PCR(Real Time PCR,RT PCR)服務,所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR 反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。 是一個常用的mRNA水平的基因表達定量技術。 

            服務內容 

            細胞/組織的基因差異表達檢測,經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理、物理處理、化學處理等),特定基 因在不同時段的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證。

            組織/細胞樣品中基因拷貝數的確定,DNA或RNA的相對和絕對定量分析。

            包括病原微生物或病毒含量的檢測,轉基因動植 物轉基因拷貝數的檢測,RNAi基因失活率的檢測等。 

            基因分型,基因突變及多態性方面的研究。 

            技術原理 

            Real-time PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號累積實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線 對未知模板進行定量分析的方法。利用熒光信號的變化實時檢測PCR擴增反應中每一個循環擴增產物量的變化,通過Ct值和 標準曲線的分析對起始模板進行定量分析。 

            實時熒光定量PCR技術具有特異性強,有效解決了PCR污染問題、自動化程度高等特點,做到PCR每循環一次就收集一個 數據,建立實時擴增曲線,準確地確定Ct值,從而根據Ct值確定起始DNA拷貝數,做到了真正意義上的DNA定量。 

            技術流程 

            一、RNA的提取 

            二、DNase I 消化樣品RNA 中的DNA 

            三、RNA瓊脂糖凝膠電泳 

            四、RNA反轉錄為cDNA Real-Time PCR引物設計的要求 

            ①Tm=55~65 ℃ 

            ②GC=30~80% 

            ③PCR擴增產物長度:引物的產物大小不要太大,一般在80~300 bp之間都可。 ④ 引物的退火溫度要高,一般要在60 ℃以上。 

            五、cDNA與引物質量檢測 

            選擇特異性好,擴增效率高的引物作為實時熒光使用引物。 

            六、利用相對定量的方法分析目的基因表達量的情況: 

            常用的看家基因有β-actin,GAPDH,18S rRNA 

            七、定量PCR檢測 

            八、擴增曲線和溶解曲線

            溶解曲線全部為單峰表明為特異性擴增,熒光擴增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數擴增階段和平 臺期。

            歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。 

            更多實驗技術服務請瀏覽網站其他內容,或來電咨詢! 

            做實驗,找星森林!您的科研生涯,我們一路相伴! 

            【平臺項目開展范圍】慢病毒,腺病毒,RNAi類,分子生物實驗,病理實驗,免疫學實驗,細胞實驗,動物實驗,蛋白組 學實驗,芯片類實驗,并為廣大客戶朋友們提供課題設計指導、基金申請指導等服務。 

            【星森林生物】已開展了數千個實驗外包項目。我們專注于醫學課題研究,已從課題申請、方案設計、試劑采購、模型構造、 標本檢測、數據分析,各個環節積累了數千個成功案例經驗,為數千個來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關實驗服務信息請咨詢星森林生物。

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