結締組織狹義上是指其含有的三種纖維:
膠原纖維、網狀纖維、彈力纖維。結締組織染色方法亦有很多種,如 Masson 三色 染色法、Van Gieson 染色法、Gomori 氨銀法 、Mallory 磷鎢酸蘇木素染色,然而以上染色方法只是側重于某一兩種組織的染色。
Russell 改良 Movat 五色套染以其染色豐富、鮮艷而大受歡迎。該染色法主要用于顯示動脈粥樣硬化斑塊。Weigert 蘇木素 用于染細胞核,藏紅品紅用于染細胞質,藏紅花染膠原組織,阿爾辛藍染基質(蛋白聚糖)。由于該試劑盒操作過程復雜,其 染色效果跟操作者經驗和數量程度有很大關系,所以同時染出十分滿意的結果并不容易。
操作步驟(僅供參考):
1、石蠟切片常規脫蠟。
2、系列乙醇水化。
3、取適量 Bouin 固定液放入微波爐中,中度加熱 30~60s, 立即放入切片處理 10min。
4、流水沖洗 10min。
5、切片入海波溶液處理 5min, 蒸餾水沖洗 2~3 次。
6、切片入阿利新藍染色液中染色 20min。
7、流水沖洗 2~5min。
8、用微波爐強火 45~60℃預熱堿性乙醇溶液后, 將切片入堿性乙醇溶液中處理 10min。
9、流水沖洗 2~5 min。
10、切片入預先配制好的試劑(D)-Weigert 蘇木素染色液中, 避光染色 60min。 11、流水稍沖洗, 蒸餾水沖洗 2~3 次, 每次 3~5min。
12、切片入預先配制好的試劑(E)-藏紅品紅染色液中, 避光染色 1 min。
13、蒸餾水沖洗 2~3 次, 每次 3~5min。
14、將切片入磷鎢酸溶液中處理 5min。
15、直接轉入弱酸分化液中處理 5min。 15、蒸餾水沖洗 2~3 次, 每次 3~5min。 16、脫水: 95%乙醇 1min, 100%乙醇 2 次, 每次 1min。
17、將切片入藏紅花染色液中,染色 5min。
18、脫水: 無水乙醇 2 次, 每次 1 min。
19.二甲苯透明,覆蓋玻片。
染色結果:
細胞核和彈力纖維 黑色
膠原蛋白和網狀纖維 黃色
蛋白聚糖 藍綠色
類纖維素、纖維素 深紅色
心肌平滑肌 紅色
泡沫細胞 紫色
注意事項:
1、由于染色力以及組織切片等原因,染色后未必顯示出全部五種顏色。
2、切片厚度一般要求 5mm 左右 。
3、彈力纖維分化通常在 2~3min 內完成 。
4、流水沖洗以除去 Weigert 蘇木素染色液非常重要,若沖洗失敗會抑制后續的染色步驟。
5、操作步驟多繁瑣,染色時間常易脫片,注意預先做防脫片處理。
6、這種染色法可顯示新型隱球菌,將其染成亮藍色。
7、 為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。