TTC染色是TTC和活細胞線粒體內的琥珀酸脫氫酶反應，生成紅色的甲月贊，用來表示細胞的活力。配制多為2％，染色要 避光，37度條件下，它是評價腦缺血損傷常用的指標。 

       微生物染色的基本原理，是借助物理因素和化學因素的作用而進行的。物理因素如細胞及細胞物質對染料的毛細現象、滲 透、吸附作用等?；瘜W因素則是根據細胞物質和染料的不同性質而發生地各種化學反應。酸性物質對于堿性染料較易吸附， 且吸附作用穩固；同樣，堿性物質對酸性染料較易于吸附。如酸性物質細胞核對于堿性染料就有化學親和力，易于吸附。但 是，要使酸性物質染上酸性材料，必須把它們的物理形式加以改變（如改變pH值），才利于吸附作用的發生。相反，堿性物質（如細胞質）通常僅能染上酸性染料，若把它們變為適宜的物理形式，也同樣能與堿性染料發生吸附作用。 

       細菌的等電點較低，pH值大約在2—5之間，故在中性、堿性或弱酸性溶液中，菌體蛋白質電離后帶陰電荷；而堿性染料電 離時染料離子帶陽電。因此，帶陰電的細菌常和帶陽電的堿性染料進行結合。所以，在細菌學上常用堿性染料進行染色。 

       影響染色的其它因素，還有菌體細胞的構造和其外膜的通透性，如細胞膜的通透性、膜孔的大小和細胞結構完整與否，在染 色上都起一定作用。此外，培養基的組成、菌令、染色液中的電介質含量和pH、溫度、藥物的作用等，也都能影響細菌的染色。 

苯胺藍染色步驟 

微生物的染色方法很多，各種方法應用的染料也不盡相同，但是一般染色都要通過制片及一套染色操作程序。 

1、制片

在干凈的載玻片上滴上一滴蒸餾水，用接種環進行無菌操作，挑取培養物少許，置載玻片的水滴中，與水混合做成懸液并涂 成直徑約1厘米的薄層，為避免因菌數過多聚成集團，不利觀察個體形態，可在載玻片之一側再加一滴水，從已涂布的菌液 中再取一環于此水滴中進行稀釋，涂布成薄層，若材料為液體培養物或固體培養物中洗下制備的菌液，則直接涂布于載玻片 上即可。 

2、自然干燥 

涂片最好在室溫下使其自然干燥，有時為了使之干得更快些，可將標本面向上，手持載玻片一端的兩側，小心地在酒精燈上 高處微微加熱，使水分蒸發，但切勿緊靠火焰或加熱時間過長，以防標本烤枯而變形。 

3、固定 

標本干燥后即進行固定，固定的目的有三個： 

1）殺死微生物，固定細胞結構。 

2）保證菌體能更牢的粘附在載玻片上，防止標本被水沖洗掉。 

3）改變染料對細胞的通透性，因為死的原生質比活的原生質易于染色。

固定常常利用高溫，手執載玻片的一端（涂有標本的遠端），標本向上，在酒精燈火焰外層盡快的來回通過3—4次，共約2 —3秒鐘，并不時以載玻片背面加熱觸及皮膚，不覺過燙為宜（不超過60℃）,放置待冷后，進行染色。 以上這種固定法在微生物實驗室中雖然應用較多普遍，但是應當指出，在研究微生物細胞結構時不適用，應采用化學固定 法?；瘜W固定法最常用的固定劑有：酒精（95%），酒精和醚各半的混合物，丙桐，1—2%的餓酸等。餓酸能很快固定細胞 但不改變其結構，故較常用。應用餓酸固定細胞的技術如下：在培養皿中放一玻璃，在玻璃上放置玻璃毛細管，在毛細管中 注入少量的1—2%餓酸溶液，同時在玻璃上再放置濕標本涂片的載玻片，然后把培養皿蓋上，經過1—2分鐘后把標本從培養 皿中取出，并使之干燥。 

4、染色 

標本固定后，滴加染色液。染色的時間各不相同，視標本與染料的性質而定，有時染色時還要加熱。染料作用標本的時間平 均約1—3分鐘，而所有的染色時間內，整個涂片（或有標本的部分）應該浸在染料之中。 若作復合染色，在媒染處理時，媒染劑與染料形成不溶性化合物，可增加染料和細菌的親和力。一般固定后媒染，但也可以 結合固定或染色同時進行。

5、脫色 用醇類或酸類處理染色的細胞，使之脫色?？蓹z查染料與細胞結合的穩定程度，鑒別不同種類的細菌。常用的脫色劑是95% 酒精和3%鹽酸溶液。 

6、復染 脫色后再用一種染色劑進行染色，與不被脫色部位形成鮮明的對照，便于觀察。革氏染色在酒精脫色后用番紅，石碳酸復紅 最后進行染色，就是復染。

7、水洗 染色到一定的時候，用細小的水流從標本的背面把多余的染料沖洗掉，被菌體吸附的染料則保留。

8、干燥 著色標本洗凈后，將標本晾干，或用吸水紙把多余的水吸去，然后晾干或微熱烘干，用吸水紙時，切勿使載玻片翻轉，以免將菌體擦掉。

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