貓 部分顯露肌梭包埋為例 

固定 

將取出的肌肉置于含 5% 戊er醛的 0.1mol/l 二甲SHEN酸Na緩沖液內，PH 值為 7.2, 原位固定 5 min(戊er醛常由 25% 溶液 稀釋而成。因其易聚合，所以使用之前應保存于 4℃ 以下)。 

將肌纖維切成 10 mm 長，以確保至少含有一個肌梭，用上述相同固定液再固定 4~14d(總固定時間因實驗室而異，固定時間 的差異一般不會明顯影響固定效果)。

緩沖液清洗 30 min。 

置于緩沖液配制的 1% 四氧化e固定 4 h(四氧化e滲透速度很慢，但薄短筒狀肌的厚度小于 1 mm，4 h 足以充分固定。一般 將四氧化e配成 2% 的儲存液，裝瓶并密封后儲存于冰箱內。配制固定液時，向儲存液內加入等量的 0.2mol/L 二甲SHEN酸 鈉緩沖液，便稀釋成了所需的終濃度)。 

脫水和包埋 

室溫下將標本用 70%、95% 和 100%(兩次）的梯度乙醇脫水，每次 10 min。 

用 1:1 的乙醇與環Y丙烷（1,2-環Y丙烷）混合液處理 15 min[環Y丙烷常用作中間溶媒，在石蠟包埋法中發揮類似「透明 劑」的作用。大多數透明劑的折射指數與脫水蛋白及其他細胞內成分相似。該名稱的由來是因為最初它們被用來固定透明的 組織，雖然現在知道它們幾乎沒有這樣的功能，但這個名稱一直沿用至今。其他脫水方法見 Glauert(1975)]。 

環氧丙燒處理 15 min。 

用 1:1 的環氧丙燒與 Epon 的混合物（除了加速劑以外的成分）浸透，置入敞口的容器內，通風櫥內過夜（揮發的環Y丙烷 能幫助硬化劑更好地向組織塊滲透)。

倒掉瓶內剩余的滲透媒質，移入新鮮的純 Epori 中。 

將切片平整地包埋于內襯鋁箔的模具內，先 45℃聚合 12 h, 再 60℃聚合 24 h 

切片和染色 

借助常規玻璃刀用超薄切片機手動切片，片厚 1/um，每 10 張切片收集為 1 組 (如需要，可用帶氯仿蒸氣的刷子靠近切片或 通過電熱絲的輻射熱使切片平鋪于水面上。玻璃刀應該經常更換，更換時應注意玻璃刀的準確復位，使用機械開關控制刀的 運動以確保連續切割時能得到相同的切片。由于刀與組織塊表面間的距離僅有幾個微米，為了在更換新刀后仍能準確定位， 可將刀背照亮，此時刀刃與組織塊表面的縫隙看起來呈一條亮線)。

用鉆石刀將蓋玻片（標準尺寸為 50 mmX20 mm) 切割成 3 mm 寬的窄條，將窄條的一端浸入液面下直接從水槽內收集切片 （圖 1-1A)(這些切片有的排列成串，有的單獨存在。用一根粘有睫毛的牙簽可以很容易地將切片導入窄條的表面，窄條需用 鐘表鑷夾持,. 將窄條的一面靠近切片呈舌尖樣伸出的一端，再使切片干燥，這個方法既簡便又能使切片很好地粘附在窄條玻 片上)。 

用軟的織物將窄條的背面擦干，任切片漂浮在窄條前端的水滴中。 

用一塊溫度約為 70”C 的熱板使切片干燥并貼附于窄條表面 [最好將一塊玻璃載玻片永久性地固定于熱板上，而將窄條置于 載玻片上烘干（圖 I-IB)]。

用甲苯胺藍（toluidineblue)(圖 1-2A) 和派羅寧（pyronine)(圖 1-2B) 在尚 pH 值條件下染色，將一滴染液滴于切片表面，加 熱直到染液滴從邊緣處開始干燥為止。水洗后用 95% 乙醇分色 [染料配制：將 0.1 g 甲苯胺藍、0.05 g 派羅寧和 0.1 g 硼砂 (四硼酸鈉）溶于 60 ml 蒸餾水即可，配好的染液應定期過濾]。 

在熱板上干燥后用 DPX[distrene(聚苯乙烯)-plasticizer(塑化劑)-xylene(二甲苯)] 封片 [一張載玻片上放置 5 個窄條，每個窄 條有 10 張切片，用 50 mmX22 mm 的蓋玻片封片（圖 1—1C)。當然，封片時應注意將貼有切片的一面朝上]。

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