實驗技術簡介:
雙向電泳(two-dimensional electrophoresis)是等電聚焦電泳和SDS-PAGE的組合,即先進行等電聚焦電 泳(按照pI分離),然后再進行SDS-PAGE(按照分子大?。?,經染色得到的電泳圖是個二維分布的蛋白質圖。
實驗原理:
雙向電泳是目前為止最有效、使用最多的蛋白分離方法。差異蛋白質組學是在雙向電泳后用考麻斯亮藍、 銀離子或熒光染料等將蛋白斑點染色,然后比較差異。本公司在各類微生物、培養細胞、動植物組織(如 動物軟硬組織、體液、植物種子、葉子等)、亞細胞組分的雙向電泳分離及后續質譜鑒定中均有豐富的經驗。
蛋白質組學雙向電泳技術服務項目:
1.根據客戶需求定制蛋白質組學實驗方案
2.各種規格膠條長度的雙向電泳
3.考麻斯亮藍染色、銀離子染色
4.DIGE系統雙向電泳
5.圖像分析
6.切膠質譜分析
服務說明:
1.我們的實驗只對我們制作的樣本負責,如您提供的是直接做等點聚焦的樣本,我們不敢保證蛋白的有效分離。
2.蛋白質組學實驗的總體實驗流程。
實驗流程:
1、樣本制備
2、固相預制膠條水化
3、第一向等電聚焦(IEF)
4、膠條平衡→第二向SDS-PAGE電泳
5、凝膠染色檢測
6、圖片掃描雙向電泳服務結果提交
1、實驗的試劑耗材、儀器設備、操作過程一份
2、實驗結果凝膠掃描圖片
3、電泳凝膠(可收費干膠)
4、剩余樣本
說明:
1.樣品制備指可用通常程序處理的原樣,如樣品較特殊(需要去除核酸、鹽等雜質或需要濃縮),價格將 視進一步處理的難度和耗材用量另行商定;
2.建議客戶提供的原樣(組織、細胞、菌體等)濕重不少于100mg,如直接提供蛋白提取物,則濃度不少 于4ug/ul,總量不少于5mg;
3.樣品的還原和烷基化過程一般在制備時進行;
4.圖象處理與切膠主要是手工操作成本。
5.客戶方需提供: 細胞,組織或蛋白。
實驗周期: 5-10天
可提供技術支持:
1、從現有的生物有機體基因組中,經過酶切消化或PCR擴增等方法,獲得帶有目的基因的DNA片段。
2、在體外,將帶有目的基因的外源DNA片段連接到具有選擇標記的載體分子上,形成能夠自主復制的重 組DNA分子。
3、將重組DNA分子轉移到適宜的受體細胞,并使其一起增殖。
4、從大量的細胞繁殖群體中,篩選出獲得了重組DNA分子的受體細胞克隆。
5、由篩選出來的受體細胞克隆,提取出已經得到擴增的目的基因,供進一步分析研究使用。
6、將分離到的目的基因克隆到表達載體上,導入受體細胞,使之在新的遺傳背景下實現功能表達,產生出人類所需要的物質。
歡迎咨詢詳談,我們會根據您的方案及需求制定詳細的服務協議。
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