ELISA（酶聯接免疫吸附反應分析）是以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合 起來的一種敏感性很高的實驗技術。 由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種 試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應物，從而保證試驗結果的特異性與穩定性。

實際應用中，通過不同的設計，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法 以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法 服務。 

技術流程 

雙抗體夾心法(檢測未知抗原) 

1、用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應孔中加0.1ml， 4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應孔 中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌(同時做空白孔，陰性對照孔及 陽性對照孔)。

3、加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴 定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液 0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內 顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏 色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上， 于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調零后測 各孔OD值，若大于規定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

間接法(檢測未知抗體) 

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1-10ug/ml， 每孔加 0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。

2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.05ml于上述 已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空 白、陰性及陽性孔對照)

3、加酶標抗體：于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二 抗體(抗抗體)0.05ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,最后一 遍用DDW洗滌。

4、加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底 物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。

5、終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 6、結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果： 反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD 值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則 410nm)處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規 定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。 

結果展示：

實驗完成周期及交付標準 ： 

1.實驗周期：1-3天 

2.交付標準：ELISA檢測原始OD值、ELISA檢測標準曲線、ELISA檢測目的蛋白濃度值、柱狀圖、實驗報告（實驗步驟、試 劑、儀器等）

客戶須知 

1、液體類標本（細胞培養上清、組織勻漿、血清、血漿、尿液、胸水、腹水、腦脊液等）； 

2、樣本保存：請盡早檢測，2-8℃保存一天；需更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存。如需周期收集樣本，請將樣本及時 分裝標號后，置-20℃或-70℃保存； 

3、請提前告訴我們：您樣本的種屬、樣本數量、待測指標及其他特殊要求。 

報告內容及標準 

1、ELISA標準曲線；

2、詳細的實驗步驟； 

3、完整的實驗報告（試劑耗材，實驗方法，實驗結果及結果說明）。