【細胞生長曲線的測定實驗目的】 

掌握繪制細胞生長曲線的原理和方法。 

【細胞生長曲線的測定背景與原理】 生長曲線是測定細胞生長數的常用方法，也是判定細胞活力的重要指標，是培養細胞生物學特性的基本參數之一。一般細胞傳代之后，經過短暫的懸浮后貼壁，隨后渡過長短不同的潛伏期，即進入快速生長的指數生長期。在細胞達到飽和密度后，停止生長，進入平臺期，然后退化衰亡。為了準確描述整個過程中細 胞數目的動態變化，需連續對細胞進行計數。通常計數6天。為精確起見，一般每次實驗設3個平行重復。 

【材料、試劑與儀器】 

1、實驗材料： Hela細胞系。 

2、實驗試劑： DMEM培養基（青霉素，鏈霉素，10%血清），0.25%胰蛋白酶溶液，臺酚藍染液。

3、 實驗儀器： 超凈工作臺，CO2培養箱，倒置顯微鏡，微量移液器，血細胞計數板，培養瓶，離心管，移液管，廢液缸，蓋玻片，24孔板。 

【方法與步驟】 

1、取生長良好的細胞，用培養基制成細胞懸液后計數。根據細胞計數結果按5×104/mL作傳代培養接種于24孔板中，共接種21孔細胞。1ml/孔。余下三孔可設傳代培養的對照。 

2、24h后每天記錄細胞數目，每次取3孔細胞，分別進行計數。計算平均值。連續計數7d。細胞用胰酶消化后加入一定量的培養基，混勻制成細胞懸液。取少量懸液與臺酚藍1:1混合。取一干凈的血細胞計數板， 蓋上蓋片，從蓋片兩邊滴入細胞懸液使之充滿計數板和蓋片之間。注意滴液勿有氣泡，也不能太多，否則會使蓋片浮起而使細胞計數不準。 

3、低倍鏡下觀察，活細胞不著色，臺盼藍著色的細胞呈深藍色，是不健康或已死亡的細胞，不能計數。 找出計數板上的方格，計算四角大格內總細胞數，壓大格線者只計左側和上方，不計右側和下方細胞懸液中細胞密度計算公式為：細胞數/mL=（四角大格內細胞數/4）×104×2 

4、根據細胞計數結果，以單位細胞數（細胞數/mL）為縱坐標，以時間為橫坐標繪制生長曲線。 

收費標準/服務周期/提供結果： 

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